超薄切片
超薄切片(Ultrathin sectioning)是指用于电子显微镜观察的极薄切片,其厚度通常在40~50纳米之间。
取材的基本要求
动作迅速,组织从活体取下后应在最短时间内投入2.5%戊二醛固定液。
所取组织的体积要小,一般不超过1mm×1mm×1mm。也可将组织修成1mm×1mm×2mm大小长条形。
机械损伤要小,解剖器械应锋利,操作宜轻,避免牵拉、挫伤与挤压。
操作最好在低温(0℃~4℃)下进行,以降低酶的活性,防止细胞自溶。
取材部位要准确。
取材过程
将取出的组织放在洁净的蜡版上,滴一滴预冷的固定液,用两片新的、锋利的刀片成“拉锯式”将组织切下并修小,然后用牙签或镊子将组织块移至盛有冷的固定液的小瓶中。如果组织带有较多的血液和组织液,应先用固定液洗几遍,然后再切成小块固定。
制备过程
超薄切片的制作使用的是超薄切片机,以及玻璃刀或钻石刀作为切割工具。为了能够成功地制成薄片,被包埋的标本的包埋剂必须具有足够的硬度,这通常通过没药树聚合来实现。具体的方法包括:首先使用四氧化锇和戊二醛固定样品,随后使用丙酮逐步去除水分,接着使用ep进行包埋。接下来,利用热膨胀或机械伸缩的方式进行切片,最后使用重金属如铀、铅等盐类进行染色。
参考资料
超薄切片技术 .百度文库.2024-11-28
超薄切片技术与电镜下的样品观察.百测网 .2024-11-28
获得高质量的超薄切片.徕卡显微系统 .2024-11-28