厌氧培养
厌氧培养（anaerobic culture）是指在没有分子态氧存在的环境中对微生物进行的培养过程，主要针对的是兼性厌氧菌和专性厌氧菌。
分类
厌氧培养因其不同的实验目的而采用多种方法，主要包括以下几种：
隔离空气法
这种方法包括在三角瓶底部填充液体培养基，通过煮沸去除空气后再迅速冷却以接种细菌。当发酵过程中产生氢气和二氧化碳时，可以进一步确认这是厌氧细菌。此外，还可以使用琼脂培养基进行穿刺培养或将培养物移植至液体培养基和固体斜面上，随后添加一层矿物油或矿物油，以防止其与空气接触。
真空法
此方法涉及将微生物置于耐压容器中，通过真空处理或填充二氧化碳、氢气、氮气、氩等气体来除去预先混合的少量氧气。在氢气存在的情况下，可以通过置换后飞溅火花等方式消除残留的氧气。
化学去氧法
这一方法利用碱性邻苯三酚、白磷、铬和硫酸等化学物质进行去氧处理，也可以使用好氧细菌及其萌发的种子，通过它们的呼吸作用消耗氧气。
加入还原剂
在培养基中加入还原剂，如0.1%的巯基乙酸钠盐或0.01%的硫化钠，有助于创造厌氧条件。这些方法可以结合使用，以更精确地鉴定厌氧菌。为了验证厌氧性，可以在碱性条件下加入葡萄糖并加热，同时加入还原型次甲蓝溶液，使其保持脱色状态。
培养工艺
厌氧培养技术的发展使得微生物厌氧培养变得更加便捷和高效。常见的厌氧培养方法包括：
厌氧产气袋法
这是一种常用的厌氧培养方法，其中特定容量的产气袋能够吸收相应体积的氧气并将其转化为二氧化碳。例如，2.5L的产气袋适合用于2.5L容积的培养，而3.5L的产气袋则适用于3.5L的培养。需要注意的是，产气袋的数量和培养物的装载量都需要按照预先设定的比例进行匹配，以确保培养条件的一致性。日本三菱生产的厌氧培养罐有两种尺寸，分别为2.5L和7.0L，分别配备相应的产气袋，以维持所需的氧气浓度和二氧化碳浓度。这两种培养罐均为长方形设计，且产气袋在使用后不会产生负压，因此无需设置泄压孔。
厌氧袋法
厌氧袋是一种透明且不透气的塑料袋，内部包含气体发生管、美兰指示剂管、钯催化剂管和干燥剂。在接种了平板后，应尽可能排出袋内的空气并密封袋口。首先折断气体发生管，然后再折断美兰指示剂管，这样能够在半小时内创造出无氧环境。如果颜色未发生变化，则表明袋内已经达到了厌氧状态，此时可以进行孵化。
厌氧手套箱法
厌氧手套箱被认为是目前国际上公认的最佳厌氧菌培养设备之一。它是一个封闭的大型金属箱，前面设有透明的聚甲基丙烯酸甲酯面板，并配有两个手套，允许用户在箱内进行操作。箱体一侧设有交换室，带有内外两扇门，外部门开启后，物品可放入交换室，关闭外部门后进行抽气和换气，直至箱体内形成厌氧环境。之后，用户可通过手套将物品转移至箱内并关闭内部门。箱内始终保持厌氧状态，这得益于充入的氢气在钯催化剂的作用下与箱内剩余的氧气反应生成水。该手套箱不仅可以调节温度，还内置孵化器或孵化器附件，以便观察厌氧菌菌落。这种厌氧箱特别适合大规模培养厌氧菌的研究，同时也可用于预还原和厌氧性无菌试验。金属硬壁型厌氧箱的抽气、充气、厌氧环境和温度等参数均可实现自动化控制。
参考资料
厌氧培养的定义.分析测试百科网.2024-10-29
厌氧培养法包括什么.爱问知识人.2024-10-29