DPPH
DPPH,即是1,1-二苯基-2-苦(1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl)、2.2-二苯基-1-苦肼基、1,1-二苯-2-苦基肼、2,2-二苯基-1-苦基肼,又称自由基接受体,化学式是C₁₈H₁₂N₅O₆,分子量为394.32,为是一种可用于定量测定自由基的物质,是一种稳定自由基型阻聚剂。虽然它本身也是自由基,但由于它们很稳定,不能引发单体聚合,只能有效地与链自由基结合,使链自由基消失。
名称
1,1-二苯基2-三1-溴-2-硝基苯肼(1,1-Diphenyl-2-picrylhydrazyl radical 2,2-Diphenyl-1-(2,4,6-trinitrophenyl)hydrazyl )
该品具有刺激性。吸入、口服或皮肤接触有害。大量使用应穿适当的防护服和戴手套。
DPPH有两个主要的应用,都用于实验室研究中:一是在含有自由基的化学反应中作为一种监测反应的物质,典型的用于抗氧化成分的体外抗氧化性评价;还可以作为电子顺磁共振信号位置和强度的标准物质。
性质应用
DPPH具有几个不同结晶形态,它们的晶格对称性和熔点(m.p.)存在差异。商品化的粉末是不同晶相的混合物,熔点在130℃附近。DPPH-Ⅰ(m.p. 106℃)是正交晶系,DPPH-Ⅱ(m.p. 137℃)是无定形态,DPPH-Ⅲ(m.p. 128-129℃)是三斜晶系。
DPPH是一种很稳定的氮中心的自由基,它的稳定性主要来自3个苯环的共振稳定作用及空间障碍,使夹在中间的氮上不成对的电子不能发挥其应有的电子成对作用。作为一种稳定的自由基,DPPH可以捕获(“清除”)其他的自由基。因此通过加入DPPH后观察某一化学反应的速率是否减慢,来作为这一反应是否具有自由基反应本质的指标。由于DPPH自由基在以300~400之间为中心处具有强烈的吸收,因此在溶液中呈现深紫色,并且在被中和之后会变为无色或浅黄色。利用这一特性可以直观地检测反应的过程,通过记录DPPH在在520nm吸光度值或者EPR信号的变化可以得到初始自由基的量。
由于DPPH是十分有效的自由基捕获剂,因此它在自由基调控的聚合反应中是一种很强的抑制剂(阻聚剂)。
作为一种稳定和良好定性的固体自由基的来源,DPPH可能是最为广泛使用的电子顺磁共振信号位置(g-marker)和强度的标准物质----通过称量可以确定新鲜配置的样品自由基的数目,DPPH的EPR分裂因子校正在g=2.0036。DPPH的信号一般聚合为单一的线,在更宽的功率范围内,信号强度与微波功率的平方根呈线性关系,因此用DPPH作为校正的标准物质十分方便。DPPH的稀释特性(每41个原子含一个不成对自旋)导致它具有一个相对小的线宽(1.5–4.7Gauss)。但是若溶剂分子保持在结晶状态并且在高频率的EPR设定下测定,线宽可能会增加。
清除测试
原理
DPPH法于1958年被提出,广泛用于定量测定生物试样和食品的抗氧化能力。此法是根据DPPH自由基有单电子,在517nm处有一强吸收,其醇溶液呈紫色的特性。当有自由基清除剂存在时,由于与其单电子联会而使其吸收逐渐消失,其褪色程度与其接受的电子数量成定量关系,因而可用分光光度计进行快速的定量分析。
实验步骤
1.用乙醇配置 0.1mmol/L 的DPPH溶液,避光保存。配置 0.5mg/mL 的Vc溶液(作为对照)。将测试样品稀释至不同浓度。
2.将2mL测试样品溶液及 2mL DPPH 溶液加入到同一试管中,摇匀,室温下暗处静置 30min 后测定其吸光度A sample,同时测定 2mL DPPH溶液与 2mL 溶剂(蒸馏水或者相应的缓冲溶液)混合后的吸光度 A 监察,以及2mL测试样品溶液与2mL乙醇混合后的吸光度A blank。
3.自由基清除能力的表示:
清除率越大表明抗氧化能力越强。为了更直观的表明样品的抗氧化能力,一般选用其他常见的抗氧化剂作为对照,比如Vc。可以通过绘制Vc浓度与清除率之间的工作曲线,用Vc当量浓度表示样品的清除自由基的能力。
清除测试的缺陷
由于DPPH是脂溶性的,因而与细胞的水性环境不匹配。现已提出了其替代法,即PTIO自由基清除法。该法可以在水溶液(或pH7.4缓冲溶液)中进行,具有较好的生物相关性。
参考资料
2.2-二苯基-1-苦肼基.上海紫一试剂厂.2024-03-21
1-二苯基-2-苦基肼.知网空间.2024-03-21
1-二苯基-2-苦肼自由基(DPPH·).知网空间.2024-03-21
阻聚剂.中国大百科全书.2024-03-21