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pbs缓冲液

缓冲液是一类能抵抗外来少量强酸强碱或稍加稀释而保持其pH值基本不变的溶液,常用来模拟器官、组织和细胞生成的生理环境,尤其在生物学、分子生物学、细胞生物学实验中,广泛使用缓冲液来维持研究体系的酸碱环境。缓冲溶液一般由足够浓度的共轭酸碱对的两种物质按适当比例溶解于水形成,共轭酸碱对的两种物质合称为缓冲系(缓冲器 system)或缓冲对(buffer pair)。

磷酸盐缓冲液(磷酸盐 buffer solution,pbs),其缓冲对为磷酸二氢钠与磷酸氢二钠(NaH2PO4-Na2HPO4)或磷酸二氢钾磷酸氢二钾(KH2PO4-K2HPO4)。PBS缓冲液中,由于H2PO4-能够二级离解,所以PBS缓冲液能够缓冲的pH值范围很广。正是由于PBS缓冲液能够使溶液pH值在较大的范围内都保持稳定,从而被广泛地应用在生物化学研究领域。这些溶液广泛用于试管内和体外研究,以及实验室稀释液、冲洗细胞悬浮液、清洗培养瓶及培养皿;这些溶液也常作为细胞培养基的添加物,商业上可用的pbs有多种不同的配方,增加钙和镁(+/+PBS)或者不增加(-/-PBS)。

配制方法

含0.05%吐温20的pH7.4的磷酸盐缓冲液(简称为PBS-T)配制方法为:

称取磷酸二氢钾(KH2PO4),磷酸二氢钠(Na2HPO4·12H2O),氯化钠(NaCl),氯化钾氯化钾),吐温-20 ,加水。

PBS:Phosphate Buffered saline

PBS 1L配方pH7.4:磷酸氢二钾(KH2PO4):0.27g,

磷酸氢二钠(Na2HPO4):1.42g,

氯化钠(NaCl):8g,

氯化钾(KCl)0.2g,

纯水约800mL充分搅拌溶解,然后加入浓盐酸调pH至7.4,最后定容到1L

保存方法

加去离子水约800mL充分搅拌溶解,然后加入浓盐酸调pH至7.4,最后定容到1L。高温高压灭菌后置于4摄氏度冰箱保存待用。

PBS缓冲液(pH7.2~7.4):NaCl 137mmol/L,氯化钾 2.7mmol/L,Na2HPO4 10mmol/L, KH2PO4 2mmol/L

PBS缓冲液一般作为溶剂,起溶解保护试剂的作用,具体试剂一般也有不同的比例配方,在针对性上就有了更好的效果。

1x PBS缓冲液就是0.01M的磷酸盐缓冲液,可直接使用。2x PBS就是2倍浓度,使用时稀释一倍使用。0.1M的pbs一般不用来配置缓冲液,用于其它用处。

作用

PBS是磷酸缓冲盐溶液的简称,不仅伪狂犬病毒要用它稀释,一般的有活性的生物制剂都要用它来稀释。

原因就是它具有盐平衡、可调整的适宜pH缓冲作用,蒸馏水不具有盐平衡作用,可以破坏生物蛋白的结构及生物特性;生理盐水不具有调整pH的作用,对完整的、具有活性的物质不能保证其在最适条件下参与生物反应,所以使用PBS是首选。

PBS也不是万能的,有的生物活性物质需要的条件比PBS还要高,就需要在平衡缓冲液中加入更多的成分,维持最佳的条件保证生物活性物质保持其最完整的特性。

参考资料